Etude des signaux intracellulaires et des mécanismes impliqués dans l'activation des plaquettes sanguines humaines conduisant à l'exposition des phospholipides procoagulants et à l'émission de microparticules.

ARTICLE

L'asymétrie des phospholipides membranaires des cellules eucaryotes est maintenue par l'activité d'une Mg²⁺-ATPase, l'aminophospholipide translocase. Dans le cas des plaquettes sanguines, la perte de cette asymétrie par stimulation cellulaire est liée au développement d'une activité procoagulante et à l'émission de microparticules également de nature procoagulante. Jean-Max Pasquet, travaillant au sein de l'équipe de Jeanne Dachary-Prigent (CR1 INSERM, son directeur de thèse) au sein de l'UMR 5533 CNRS (Dir. : A. Nurden) à Bordeaux, a utilisé une sonde des aminophospholipides, l'annexine V recombinante, en cytométrie en flux pour étudier les mécanismes impliqués dans ces phénomènes. Il a démontré que la formation de microparticules, qui est liée à l'exposition des aminophospholipides, est corrélée à l'activation d'une thiol-protéase Ca²⁺-dépendante, la calpaïne, qui participe à la réorganisation du cytosquelette sous membranaire et à la transduction des signaux consécutive à l'activation cellulaire. L'utilisation d'inhibiteurs spécifiques des Ca²⁺-ATPase intracellulaires a montré que l'activation de la calpaïne et la formation de microparticules dépendent d'un influx de Ca²⁺ de l'ordre de 3 à 8 mM, une élévation beaucoup plus importante que celle accompagnant la perte d'asymétrie membranaire. Même si l'activation plaquettaire est associée à une augmentation de l'activité des tyrosine kinases, la formation des microparticules est corrélée à la déphosphorylation des protéines et semble être sous le contrôle d'une ou plusieurs tyrosine phosphatases. L'étude d'une pathologie présentant un défaut d'exposition des aminophospholipides procoagulants et la formation de microparticules, le syndrome de Scott (étude effectuée en collaboration avec Jean-Marie Freyssinet, Strasbourg) est en faveur de cette hypothèse. Une forte perturbation des tyrosine-phosphorylations a été détectée dans les plaquettes « Scott » après activation. Ce travail ouvre de nouvelles perspectives pour le contrôle pharmacologique de l'expression de l'activité procoagulante cellulaire, un facteur de risque important dans la thrombose veineuse.

REFERENCES

1. Dachary-Prigent J, Freyssinet J-M, Pasquet J-M, Carron J-C, Nurden AT. Annexin V as a probe of aminophospholipid exposure and platelet membrane vesiculation : a flow cytometry study showing a role for free sulfhydryl groups. Blood 1993 ; 81 : 2554-65.

2. Dachary-Prigent J, Pasquet J-M, Freyssinet J-M, Nurden AT. Calcium involvement in aminophospholipid exposure and microparticle formation during platelet activation : a study using Ca²⁺-ATPase inhibitors. Biochemistry 1995 ; 34 : 11625-34.

3. Pasquet J-M, Dachary-Prigent J, Nurden AT. Calcium influx is a determining factor in platelet calpain activation and microparticle formation. Eur J Biochem 1996 ; 239 : 647-54.

4. Pasquet J-M, Toti F, Nurden AT, Dachary-Prigent J. Procoagulant activity and active calpain in platelet-derived microparticles. Thromb Res 1996 ; 82 : 509-22.