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Virologie

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Norovirus humain : production de particules virales in vitro Volume 9, numéro 6, novembre-décembre 2005

Auteur
Laboratoire de bactériologie‐virologie, Faculté de médecine Jacques Lisfranc, CHU de Saint‐Étienne

Auteur(s) : S. Pillet

Laboratoire de bactériologie-virologie
Faculté de médecine Jacques Lisfranc
CHU de Saint-Étienne

Les norovirus humains sont des virus à ARN non enveloppés, du genre Norovirus, de la famille des Caliciviridae, responsables de fréquentes épidémies de gastro-entérite virale en Europe et aux États-Unis. Cependant, en l’absence de système cellulaire permettant leur réplication in vitro, ces virus restent mal caractérisés. Le génome de la souche humaine prototype, le virus de Norwalk (Norwalk virus, NV) a été séquencé et cloné. Trois ORF ont été identifiés : l’ORF1 code les protéines non structurales, dont une protéase, et l’ARN polymérase virale ; l’ORF2 et l’ORF3 codent les protéines structurales VP1 et VP2. L’équipe de Mary K. Estes a cloné le génome du NV et l’a exprimé dans les cellules embryonnaires de rein humain 293T à l’aide d’un vecteur vaccine [1]. Les cellules infectées par un vecteur codant l’ARN génomique du NV expriment la protéase virale et l’ARN polymérase, mais aucune expression de protéine de capside n’est détectée. Chez les norovirus animaux (calicivirus félin et virus de la maladie hémorragique du lapin), l’expression des protéines structurales est contrôlée par un ARN subgénomique produit au cours de la réplication virale. L’étude de la cinétique de synthèse des ARN par northern-blot montre qu’un ARN subgénomique est détecté à partir de la 6e heure post-transfection et permet l’expression de la protéine majeure de capside VP1 dans les cellules 293T. La transcription de cet ARN subgénomique est assurée par l’ARN polymérase virale au cours de la réplication à partir d’un site interne d’induction de la transcription, conservé parmi les calicivirus. L’expression de la protéine majeure de capside VP1 en système baculovirus, en présence ou non de la protéine VP2, permet la production de pseudo-particules virales. Les cellules 293T infectées avec le vecteur codant l’ARN subgénomique expriment des particules vides constituées de VP1 et de VP2. Seule l’expression simultanée de l’ARN subgénomique et de l’ARN génomique dans les cellules 293T assure une synthèse de protéines de capside en quantité suffisante et capable d’encapsider le génome viral complet. Ces particules virales obtenues in vitro pour la première fois ont une densité similaire à celle des particules isolées dans les selles de patients infectés. En l’absence de système cellulaire permissif, leur infectiosité n’a pas pu être testée. Cependant, le développement de ce clone infectieux du NV a permis d’avancer dans la compréhension de la biologie des norovirus humains dont l’impact en santé publique est important.

Référence

1. Asanaka M, Atmar RL, Ruvolo V, Crawford SE, Neill FH et Estes MK. Replication and packaging of Norwalk virus RNA in cultured mammalian cells. Proceedings of the National Academy of Sciences 2005 ; 102 : 10327-32.