Auteur(s) : Alain Bernheim, GFCO, Laboratoire de génomique cellulaire des cancers, UMR 1599 CNRS et Département de pathologie, Institut Gustave-Roussy, 39, rue Camille-Desmoulins, 94805 Paris-Villejuif Cedex..
Résumé : L'étude des chromosomes dans les proliférations malignes a démontré le rôle essentiel des remaniements chromosomiques acquis dans l'oncogenèse et la progression tumorale. Il peut s'agir d'effets de position (fusion ou dérégulation de gènes) révélés par des translocations, des inversions ou des anomalies quantitatives (perte, gain, amplification). Les méthodes d'investigation qui ont considérablement progressé, passant de l'étude morphologique en bande du caryotype à l'hybridation in situ de séquences spécifiques de gènes ou de chromosomes communément appelées peintures chromosomiques, permettent une caractérisation très fine de ces remaniements de structure, mais aussi des anomalies quantitatives. Ces dernières peuvent aussi être détectées par l'hybridation in situ comparative (CGH), actuellement sur chromosomes normaux, plus tard sur des micro-matrices. On se rend compte ainsi de la réalité du processus multi-étape dans la plupart des tumeurs solides. Leurs anomalies chromosomiques sont de plus en plus utilisées pour leur intérêt diagnostique et leur valeur pronostique.
Morphologie : mitose et caryotype en bandes R montrant une translocation
t(3;9)(q12;p24).
FISH : a) Peinture du 9 (rhodamine émettant en rouge) et du 22
(FITC, vert) montrant une t(9;22). b) Démonstration d'une double
fusion BCR-ABL (ou duplication d'un chromosome Philadelphie) avec des
sondes ABL en rouge et BCR en vert. Les deux gènes de fusion sont
oranges (signaux rouge + vert colocalisés), le gène ABL
normal est rouge intense, BCR est vert vif, enfin il persiste un discret
signal ABL sur le 9q+ provenant de la t(9;22)(q34;q11). c) Métaphase
tumorale montrant de nombreux remaniements mis en évidence par
du Fish en 24 couleurs (MFISH). d) Fish avec une sonde MYCN (2pter) sur
des noyaux de neuroblastomes. On constate une amplification de ce gène
(signal rouge) variant de cellule à cellule. En revanche on n'observe
que deux centromères de chromosome 2 (spots verts) dans toutes
les cellules. Il est donc probable que MYCN soit amplifié sous
forme de double minute.
CGH : e) Mitose normale servant de cible à la Fish d'un mélange
équimoléculaire d'ADN tumoral (vert) et d'ADN normal (rouge).
Les chromosomes ocres révèlent une absence d'anomalie quantitative
pour les séquences correspondantes de l'ADN tumoral, les chromosomes
rouges traduisent une perte, les segments verts un gain. f) Un bras long
de chromosome 3 révèle un gain alors que le bras court n'est
pas déséquilibré. La courbe du rapport vert/rouge
le long du chromosome mesure cet état de fait. Une telle quantification
est pratiquée pour tous les chromosomes. g) Dans cette même
tumeur, amplification d'un segment chromosomique (vert intense). Une Fish
avec une sonde spécifique révèle une amplification
de l'ordre de sept fois par génome haploïde. h) Un exemple
de CGH sur matrice de dépôts d'ADN (Genosensor, Vysis).
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