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Détection de l’ARN du virus de l’hépatite delta par une RT‐PCR rapide en une étape |
Annales de Biologie Clinique. Volume 62, Numéro 3, 319-24, Mai-Juin 2004, De mémoire d’interne
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 Article gratuit
 Summary
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Auteur(s) : E. Ombandza‐Moussa, E. Dussaix, A.M. Roque‐Afonso |
Résumé : Cet article décrit une méthode de détection de l’ARN du virus de l’hépatite delta (VHD), où la transcription inverse (RT) et l’amplification (PCR) sont réalisées dans le même tube, réduisant ainsi le temps de manipulation et le risque de contamination. L’ARN extrait à partir de sérum ou plasma par une technique sur microcolonnes (kit QIAamp
® viral RNA, QIAgen), est rétro‐transcrit et amplifié avec le kit One‐step RT‐PCR (QIAgen) en utilisant des amorces situées dans des régions conservées correspondant aux séquences ribozymiques. La sensibilité de la technique évaluée à partir d’un échantillon de titre estimé est de 420 copies par tube. Sa spécificité a été montrée par la négativité de 24 échantillons de sujets anti‐VHD négatifs (sujets sains ou infectés par d’autres virus) et sa reproductibilité par la détection d’un échantillon de titre faible passé dans cinq séries différentes. Cette technique de RT‐PCR One‐step spécifique et reproductible, permet la détection rapide de l’ARN VHD témoin d’une infection active. Son adaptation au diagnostic de routine dans un laboratoire de virologie médicale est possible et va permettre son évaluation sur un plus grand nombre d’échantillons. |
Mots-clés : virus de l’hépatite delta, amplification génique (PCR), ARN VHD, hépatite chronique |
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