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Méthode chromogénique d’identification rapide de Staphylococcus aureus |
Annales de Biologie Clinique. Volume 57, Numéro 2, 191-6, Mars - Avril 1999, Articles originaux
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 Article gratuit
 Summary
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Auteur(s) : S. Langlet, G. Quentin, G. Contant, J.-C. Ghnassia |
Résumé : Staphylococcus aureus est responsable d’infections nosocomiales graves et de septicémies. L’identification rapide de cette espèce est donc une nécessité en microbiologie clinique. La plupart des méthodes actuelles d’identification de S. aureus nécessite une incubation de 18 à 24 h. Nous décrivons une méthode d’identification en 2 h, basée sur la détection de la staphylocoagulase à l’aide de prothrombine humaine et d’un susbtrat synthétique chromogène. Le nombre de souches de staphylocoques, collectées pour cette étude dans 4 hôpitaux français, s’élève à 242 (160 S. aureus, 82 staphylocoques à coagulase négative). Elles ont été identifiées par les méthodes suivantes : recherche de la coagulase par coagulation du plasma citraté de lapin, considérée comme la méthode de référence, réalisation de deux galeries biochimiques (Rapidec® Staph et Api® Staph ou ID 32® Staph) et un test d’agglutination (Pastorex Staph® ou Pastorex Staph-plus®). Une souche de S. intermedius a été fournie par la collection de l’Institut Pasteur. Une suspension bactérienne, ajustée à 2 unités Mac Farland dans un milieu de culture adapté, est mélangée à volume égal avec une solution de prothrombine humaine et le substrat chromogène. Après 1 à 2 h d’incubation à 37 °C, l’intensité de la coloration jaune du mélange est observée à l’œil nu ou mesurée à 405 nm à l’aide d’un spectrophotomètre. Quinze tripeptides chromogènes ayant une affinité thrombine-like et un groupement révélateur paranitroaniline ont été comparés. Avec le substrat dont la vitesse d’hydrolyse et l’affinité enzymatique sont les plus élevées (SQ149), l’ensemble des souches de S. aureus donne un résultat positif : 94,7 % des S. aureus méticilline-sensibles sont détectés après 1 h d’incubation, pour seulement 52,3 % des S. aureus méticilline-résistants ; 98,4 % des souches de S. aureus méticilline-résistants sont détectés après 2 h d’incubation. Aucun résultat faussement positif n’est observé pour les 82 souches de staphylocoques à coagulase négative. La méthode chromogénique montre une très bonne répétabilité et reproductibilité. Elle ne nécessite aucun test complémentaire. La sensibilité est de 99,4 % et la spécifité de 100 %. |
Mots-clés : Staphylococcus aureus – Substrats chromogènes – Staphylocoagulase – Identification rapide. |
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