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Evaluation d’un système modulaire de chromatographie liquide haute performance pour le diagnostic des hémoglobinopathies |
Annales de Biologie Clinique. Volume 56, Numéro 6, 734-9, Novembre - Décembre 1998, Pratique quotidienne
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 Article gratuit
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Auteur(s) : D. LUSINA, A. SIFI, P. MATHIEU, M.-N. ADAM, M.-P. LE PENNEC, T. GUEROUT, F. BALEDENT |
Résumé : Le diagnostic biologique des hémoglobinopathies repose sur deux principes :
- d'une part la mise en évidence et la quantification de variants dont la charge ou l'affinité pour un support permettent de les séparer des fractions normales : hémoglobines A ou Ao (HbAo), A2 (HbA2) et fœtale (HbF), les variants les plus fréquents étant les hémoglobines S (HbS), C (HbC), et E (HbE) ;
- d'autre part les dosages de fractions mineures. Le taux d'HbA2 est particulièrement important pour le diagnostic des syndromes thalassémiques. Le taux d'HbF est un critère essentiel du diagnostic des persistances héréditaires de l'HbF ; c'est aussi un critère pronostisque dans les syndromes drépanocytaires majeurs ; de plus, dans certaines formes graves de drépanocytose, un traitement par hydroxyurée visant à augmenter l'HbF est prescrit.
En pratique, on utilise en général une technique électrophorétique de première intention, en milieu alcalin, les variants mis en évidence étant confirmés par une seconde technique électrophorétique, en milieu acide. On peut également recourir au test d'Itano (test de solubilité) et au test de falciformation pour l'hémoglobine S.
Le dosage des fractions mineures est en général réalisé à l'aide de microcolonnes de chromatographie ou par élution de la bande électrophorétique pour l'HbA2, et par étude de la résistance à la dénaturation alcaline pour l'HbF [1].
Les techniques de chromatographie liquide haute performance (CLHP) sont utilisées pour les dosages d'HbA2, d'HbA1c et d'HbF, avec la possibilité de mise en évidence de variants [2-6]. Des automates de CLHP proposant plusieurs programmes spécifiques d'étude de l'hémoglobine sont également disponibles [5, 7-9]. L'inconvénient majeur est le coût du matériel nécessaire et le prix de revient élevé du test.
Il nous a paru intéressant d'adapter un équipement de CLHP modulaire couramment utilisé pour les dosages d'HbA1c à l'étude des hémoglobinopathies en installant en parallèle une deuxième colonne destinée au dosage de l'HbA2, et d'évaluer cette technique de CLHP comme technique de première intention dans l'étude des hémoglobines. Notre but était d'apprécier l'intérêt de disposer, à partir d'une seule technique, des taux d'HbA2 et d'HbF pour tous les échantillons, et de la mise en évidence et de la quantification des variants les plus courants, dans les circonstances diagnostiques que nous rencontrons habituellement. |
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