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Annales de Biologie Clinique

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Methods in molecular medicine : vascular disease, molecular biology and gene therapy protocols Volume 59, numéro 2, Mars - Avril 2001

Auteur
  • Page(s) : 241
  • Année de parution : 2001

Sous la direction d'Andrew H. Baker. Humana Press, 1999, 435 pages. Le présent ouvrage est un manuel destiné à un public possédant une faible expérience des techniques de biologie moléculaire. Il décrit des protocoles de base nécessaires pour étudier l'aspect génétique et phénotypique des maladies vasculaires. Il se compose de 7 chapitres. Les chapitres 1 à 5 fournissent des protocoles de base nécessaires à l'identification et à la caractérisation moléculaire de gènes impliqués dans les maladies cardio-vasculaires. Les chapitres 6 et 7 traitent de l'aspect thérapeutique des maladies cardio-vasculaires par une approche de thérapie génique. Chaque chapitre se compose d'une introduction, montrant dans quel but utiliser les techniques citées en justifiant leur choix, de matériels bien détaillés, de méthodes expliquées point par point et illustrées par des exemples, de remarques utiles, de références bibliographiques. Les schémas et illustrations sont clairs et bien légendés. Le chapitre 1 décrit trois méthodes utilisées pour la détection de mutations de gènes connus comme étant impliqués dans les maladies cardio-vasculaires. Parmi ces trois méthodes composants trois sous-chapitres, deux sont des techniques couramment utilisées en laboratoire, comme la SSCP (single-strand conformation polymorphism) ou la DGGE (électrophorèse en gradient de gel dénaturant). Le chapitre 2 décrit des méthodes permettant d'identifier de nouveaux gènes impliqués dans les maladies cardio-vasculaires. Dans un premier temps, les auteurs montrent la nécessité d'obtenir des ARN messagers de bonne qualité et y consacrent un sous-chapitre entier. Deux techniques sont décrites pour identifier des gènes différemment exprimés entre des cellules vasculaires normales et pathologiques, permettant d'identifier des gènes impliqués dans les maladies cardio-vasculaires, et aussi les techniques classiques utilisées pour déterminer la séquence codante d'un gène d'intérêt, nécessaire pour l'étude par la suite d'éventuelles mutations. Les chapitres 3 et 4 détaillent les techniques nécessaires à l'étude de l'expression de gènes dans les cellules vasculaires. Le chapitre 3 décrit la façon d'étudier la régulation de l'expression de gènes. Les sous-chapitres permettent de suivre le cheminement des différentes approches techniques nécessaires à cette étude, bien que, parmi toutes les techniques utilisées en laboratoire, seules certaines sont décrites. En outre, il manque à ce chapitre un point mentionnant le fait qu'il est nécessaire d'avoir cloné le gène pour pouvoir étudier son expression. Le chapitre 4, suite logique du chapitre 2, décrit les protocoles permettant de quantifier et de localiser l'expression d'un gène dans les tissus et les cellules vasculaires. Le chapitre 5 décrit une approche physiopathologique des maladies cardio-vasculaires par l'analyse de l'apoptose (ou mort programmée) et des changements phénotypiques. Deux sous-chapitres sont consacrés à l'étude des marqueurs de l'apoptose, en soulignant les difficultés techniques et en décrivant les techniques précisément utilisées pour des cellules vasculaires ou des tissus. Un sous-chapitre montre l'utilisation de la technique d'électrophorèse 2D dans l'analyse de l'expression protéique. Ce sous-chapitre montre l'importance de connaître la cartographie protéique d'un type cellulaire donné, utilisé comme référence dans l'étude d'une pathologie associée au type cellulaire. Enfin, les deux derniers chapitres fournissent les protocoles détaillés de transfert de gènes dans différents types de cellules vasculaires en culture et, in vivo, dans un but de thérapie génique. Cet ouvrage est donc un guide pour l'utilisation des techniques de biologie moléculaire dans l'étude des maladies cardio-vasculaires, en se référant aux références citées. Il est cependant nécessaire d'avoir des connaissances au préalable théoriques.