Standardisation du test de Kleihauer

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Malgré la mise en place des injections de gammaglobulines anti-D dès les années 1970, l'allo-immunisation fœto-maternelle due à l'antigène D reste fréquente en France et ses conséquences graves. Une amélioration de la prévention est donc souhaitable et passe, notamment en ce qui concerne les biologistes, par la standardisation des analyses pratiquées.

L'immunisation fœto-maternelle se produit lors du passage d'hématies fœtales dans la circulation maternelle. Ces hémorragies sont des événements fréquents au cours de la grossesse, et parfois spontanés, mais dont le risque s'accroît lors de manœuvres ou de traumatismes utérins, nécessitant alors la mise en place de mesures préventives. Ainsi, une injection d'immunoglobulines anti-D est généralement indispensable dans les situations suivantes :

- après accouchement d'un enfant D positif (RH1) chez une femme D négatif (RH-1) ;

- après interruption volontaire de grossesse, fausse couche spontanée, grossesse extra-utérine, mort fœtale in utero ;

- après amniocentèse, réduction embryonnaire, ponction de sang fœtal, cerclage du col de l'utérus, traumatisme abdominal, métrorragies, menace d'accouchement prématuré...

Le Laboratoire français du fractionnement qui commercialise ce produit, recommande d'administrer 100 µg d'immunoglobulines anti-D en dose de base et 100 µg supplémentaires par tranche de 20 hématies fœtales pour 10 000 hématies maternelles. Afin d'adapter la dose d'immunoglobulines anti-D à injecter, il est donc essentiel de quantifier au préalable l'hémorragie fœtomaternelle.

Cette quantification consiste généralement à évaluer la proportion d'hématies contenant de l'hémoglobine fœtale, présentes dans le sang maternel. À cet effet, différentes techniques existent, mais une compilation de la littérature montre que le test de Kleihauer reste encore le plus couramment pratiqué. Cette coloration, simple et réalisable en urgence, est basée sur l'instabilité à pH acide de l'hémoglobine A (adulte). Après élution de l'HbA, l'hémoglobine F est colorée par une solution d'hématoxyline acide et la proportion d'hématies fœtales pour 10 000 hématies est évaluée au microscope. Toutefois, ce test est peu standardisé, différents protocoles existent, et il nous a semblé utile de répertorier les réactifs et les modes opératoires utilisés dans les différents laboratoires pratiquant cette analyse et d'évaluer anonymement la reproductibilité inter-opérateur et inter-laboratoire. Pour cela, des frottis sanguins colorés, réalisés à partir d'un mélange déterminé d'hématies fœtales et d'hématies adultes seront adressés aux biologistes qui souhaitent participer à cette étude. Dans un deuxième temps, il sera envisagé de réaliser la même opération à partir d'échantillons de sang total ce qui permettra alors de comparer les différentes techniques disponibles et de vérifier la transférabilité des résultats. Ce travail pourra ensuite éventuellement déboucher sur la mise en place d'un contrôle de qualité et de recommandations de bonnes pratiques.

Nous remercions par avance tous ceux qui voudront bien participer à cette opération et nous leur demandons de bien vouloir s'adresser aux biologistes organisateurs : C. Simonnet (Tél. : 05 56 79 45 04 ; simonnet@proxilab.com) et Y. Brossard (Tél. : 01 44 73 83 00).

Bibliographie

Brossard Y, Maillard C. Peut-on cibler la prévention de la maladie rhésus ? Le Concours Médical 2001 ; 123-13 : 871-3.

Kleihauer E, Braun H, Betke K. Demostration von fetalem hamoglobin in den erythozyten eines blutausstrichs. Klin Wochensshr 1957 ; 35 : 637-42.

Mannessier L, Alie-Daram S, Roubinet F, et al. La prévention de la maladie hémolytique du fœtus et du nouveau-né : il faut agir ! J Gynecol Obstet Reprod 2000 ; 29 : 441-4.