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Le ciblage de la protéine Doppel, homologue de la protéine du prion, inhibe sélectivement l’angiogenèse Volume 11, issue 4, Octobre 2016

Figure 1. Colocalisation de la protéine Doppel et du marqueur endothélial CD31 dans la tumeur SCC7 implantée dans des souris immunodéficientes. De haut en bas : marquage de Doppel, de CD31 et des deux protéines simultanément par un contrôle négatif (à gauche) et par un anticorps spécifique (à droite).

Figure 2. A. Imagerie par bioluminescence in vivo d’implants de cellules HUVEC transfectées par les cDNA du seul gène de la luciférase (HU+luc, en haut) ou par les cDNA du gène de la luciférase et celui du gène PRND codant la protéine Doppel (HU+luc+dpl, en bas), dans des souris immunodéficientes. B. Quantification du nombre de vaisseaux par mm2 (MVD = microvascular density) dans des implants de même provenance, à l’aide d’un anticorps dirigé contre le marqueur endothélial CD34 humain. Doppel n’est pas exprimée dans les implants HU+luc. ***p < 0,001, n = 4.

Figure 3. Western blots montrant l’expression in vitro de plusieurs kinases phosphorylées, de la protéine Doppel et de l’actine (contrôle) dans des cellules HUVEC natives (HU) ou transfectées par le cDNA du gène codant Doppel (HU+dpl). Les bandes de gauche (−) sont obtenues à l’état basal, les bandes de droite (+) sont obtenues après incubation des cellules avec un anticorps anti-Doppel.

Figure 4. Co-immunoprécipitation de la protéine Doppel avec VEGFR2 (A) mais pas avec VEGFR3 (B), obtenue dans des extraits protéiques de cellules endothéliales tumorales (TEC). A. Le Western blot montre que l’immunoprécipitation de VEGFR2 entraîne Doppel dans le précipité et que celle de Doppel entraîne VEGFR2. B. L’immunoprécipitation de VEGFR3 n’entraîne que VEGFR3 et celle de Doppel n’entraîne que Doppel.

Figure 5. Quantification de Western blots montrant la disparition progressive de VEGFR2 de cellules endothéliales tumorales (TEC) incubées en présence d’un anticorps anti-Doppel (α-Doppel), alors que VEGFR2 reste constant quand les cellules sont incubées avec une immunoglobuline aspécifique (IgG). Ceci montre que Doppel régule l’internalisation de VEGFR2 et le maintient fonctionnel.

Figure 6. Co-localisation de Doppel avec le marqueur endothélial CD31 in vivo, dans des implants de cellules endothéliales tumorales (TEC) natives (en haut) ou dans lesquelles l’expression du gène codant Doppel est inhibée (en bas).

Figure 7. Structure de la molécule polymérique LHbisD4 proposée comme anti-angiogénique, faite d’un enchaînement linéaire de résidus osidiques sulfatés (héparine) sur lequel sont branchés des résidus d’acide désoxycholique.

Figure 8. Western blot (à gauche) et sa quantification (à droite) montrant dans des cellules endothéliales tumorales (TEC) en culture, in vitro, la disparition progressive de VEGFR2 sous l’effet de la molécule LHbisD4 proposée comme anti-angiogénique. L’effet est comparable à celui de l’anticorps anti-Doppel dans le même modèle (Cf. figure 5).

Figure 9. Effet de LHbisD4 sur la prolifération cellulaire (en haut) et sur l’angiogenèse (en bas) dans des tumeurs SCC7 transplantées dans des souris immunodéficientes. Les anticorps utilisés dans ces images d’immunohistochimie sont dirigés contre PCNA (un marqueur général de prolifération) et contre CD31 (un marqueur des cellules endothéliales).

Figure 10. Effet antitumoral in vivo de LHbisD4 à la dose de 10 mg/kg sur des tumeurs SCC7 transplantées chez des souris immunodéficientes.