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En 1931, l'équipe de Daubney a montré pour la première
fois l'existence d'inclusions intranucléaires dans des hépatocytes
infectés par le virus de la fièvre de la vallée du
Rift (famille des Bunyaviridés, genre Phlebovirus) [1].
Plus tard, la présence de ce filament nucléaire dans les
cellules infectées par le virus de la fièvre de la vallée
du Rift (FVR) a été corrélée avec l'expression
d'une protéine non structurale, la protéine NSs [2]. De
plus, la localisation nucléaire de la structure filamenteuse est
tout à fait inattendue car tout le cycle viral se déroule
dans le cytoplasme. Cette localisation nucléaire est particulière
à la protéine NSs du virus de la FVR puisque toutes les
autres protéines NSs des autres phlebovirus connus sont
localisées uniquement dans le cytoplasme [3-5].
Pour une meilleure compréhension du mécanisme de formation
du filament nucléaire, nous avons exprimé la protéine
NSs sous forme d'une protéine recombinante en utilisant le système
d'expression dérivé du virus de la forêt de Semliki
[6].
Les examens de cellules par immunofluorescence après visualisation
à l'aide d'un microscope confocal nous ont permis de montrer que
le filament se forme de la même façon dans les cellules infectées
par le virus de la FVR (ici la souche MP12) (figure
1, A) que dans la cellule exprimant la forme recombinante de la protéine
NSs (figure 1, C). Ce
résultat indique que les autres protéines virales ne sont
pas impliquées dans la formation du filament. Par la technique
du double hybride [7], nous avons déterminé que la protéine
NSs possède la propriété de s'associer avec elle-même
et que le domaine de dimérisation est localisé dans les
dix amino-acides carboxy-terminaux [8]. Pour déterminer le rôle
de l'interaction de la protéine dans la formation du filament,
nous avons exprimé, à l'aide du réplicon Semliki,
les formes de la protéine NSs délétées des
six, dix ou dix-sept amino-acides carboxy-terminaux. La forme délétée
des six acides aminés carboxy-terminaux (SFV-NSsCDELTA6) (figure
1, D) forme toujours le filament nucléaire de la protéine
; en revanche, les protéines mutantes NSs délétées
du domaine d'interaction de la protéine avec elle-même, c'est-à-dire
des dix (SFV-NSsCDELTA10) et des dix-sept acides aminés carboxy-terminaux
(SFV-NSsCDELTA17) (figure
1, E et F) ne sont plus capables de former de filament. Toutefois,
toutes ces protéines mutées ont conservé leur capacité
à migrer dans le noyau où elles forment des agrégats.
Ces résultats nous ont permis de conclure que l'interaction de
la protéine avec elle-même est indispensable à la
formation du filament nucléaire. Néanmoins, le rôle
de cette protéine et de ce filament au cours du cycle viral reste
encore énigmatique.
REFERENCES
1. Daubney RJ, Hudson JR, Garnham PC. Enzootic hepatitis or Rift
Valley fever : an undescribed virus disease of sheep, cattle, and man
from East Africa. J Pathol Bacteriol 1931 ; 34 : 545-79.
2. Struthers JK, Swanepoel R. Identification of a major non-structural
protein in the nuclei of Rift Valley fever virus-infected cells. J
Gen Virol 1982 ; 60 : 381-4.
3. Goldbach R, Peters D. Molecular and biological aspects of
tospoviruses. In : The Bunyaviridae. R.M. Elliott, Ed. Plenum Press,
New York. 1996 : 129-53.
4. Overton HAT, Ihara T, Bishop DHL. Identification of the N
and NSs proteins coded by the ambisense S RNA of Punta Toro phlebovirus
using monospecific antisera raised to baculovirus expressed N and NSs
proteins. Virology 1987 ; 157 : 338-50.
5. Smith JF, Pifat DY. Morphogenesis of sandly fever virus (Bunyaviridae
family). Virology 1982 ; 121 : 61-81.
6. Berglund P, Sjöberg Garoff H, Atkins GJ, Sheahan BJ,
Lilljeström P. Semliki forest virus expression system : production
of conditionally infectious recombinant particles. Bio/Technology
1993 : 11.
7. Fields S, Song O. A novel genetic system to detect protein-protein
interactions. Nature 1989 ; 340 : 245-6.
8. Yadani FZ, Kohl A, Préhaud C, Billecocq A, Bouloy M.
The carboxy-terminal acidic domain of rift Valley fever virus NSs protein
is essential for the formation of filamentous structures but not for the
nuclear localization of the protein. J Virology 1999 ; 73 : 5018-25.
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