Author(s) : M. LEGRAND , G. AYMARD , V. CALVEZ , R. TUBIANA , M. CADART , B. DIQUET, Laboratoire de pharmacocinétique, Service de pharmacologie clinique, Assistance publique des hôpitaux de Paris,
hôpital Pitié-Salpêtrière, 47-83, boulevard de l’Hôpital, 75634 Paris Cedex 13.
Summary : A new HPLC assay was developed for the simultaneous determination of indinavir, nelfinavir, ritonavir, saquinavir, using 1 ml plasma sample. A liquid-liquid extraction procedure was coupled with a reverse-phase HPLC separation using column switching. Two phenyl columns (100 x 4.6 mm, and 250 x 4.6 mm) are commutated through a ten-port electrically actuated valve. The mobile phase contains acetonitrile and 0.03 M dinatrium hydrogenophosphate (55/45 %). The quantification is performed by UV-detection at a wavelength of 240 nm for ritonavir and saquinavir, and 261 nm for indinavir and nelfinavir. Calibration curves are linear over the range 0.5 to 20 mg/ml, 0.005 to 1 mg/ml, 0.05 to 10 mg/ml for ritonavir, saquinavir, indinavir and nelfinavir, respectively. Correlation coefficients are better than 0.998 for all compounds, with both within and day-to-day coefficients of variation lower than 10 %. This method is suitable for drug monitoring.
Figure 3. Diagramme du système
autour du commutateur de vanne. I : injecteur, P : pompe, Col :
colonne, D : détecteur, W : poubelle.
Figure 4. Chromatogrammes
des composés extraits à partir d'un plasma humain vierge.
A : 240 nm, B : 261 nm.
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Figure 5. Chromatogrammes des composés extraits à
partir d'un plasma surchargé, niveau de concentration faible (indinavir
et nelfinavir 0,5 mug/ml, ritonavir 2 mug/ml, saquinavir 0,005 mug/ml).
A : 240 nm ; B : 261 nm.
EI : étalon interne.
Figure 6. Chromatogrammes des composés extraits à
partir d'un plasma de patient traité (lambda = 240 nm) par ritonavir
(100 mg x 2/j) et saquinavir (800 mg x 2/j).A : prélèvement
en résiduelle ; B : prélèvement au pic.
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