ARTICLE
Auteur(s) : O
Calatayud1, JM Tenias2, X
Castells1
1Laboratoire de biochimie, Hôpital lluis Alcanyis
Xàtiva, Espagne
2Service de médecine préventive, Hôpital lluis Alcanyis
Xàtiva, Espagne
Article reçu le 10 Août 2005, accepté le 28 Novembre 2005
Les mesures sur plasma, à partir d’échantillons recueillis avec
héparine, sont très fréquents dans les laboratoires, spécialement
pour des patients sous traitement anticoagulant. De plus, ces
prélèvements peuvent rapidement être centrifugés et préviennent la
libération du potassium et autres substances pendant le processus
de coagulation comme il se produit avec le sérum [1]. Pour cette
raison, beaucoup de laboratoires choisissent d’analyser
systématiquement des échantillons plasmatiques. Cependant,
l’héparine est un mucopolysaccharide sulfaté polyanionique, capable
d’interférer avec certaines substances. On a décrit des
interférences dans les dosages de calcium ionique (quand la
concentration d’héparine est supérieure à 15 UI/mL) [2], et de
cholestérol et de triglycérides [3]. En outre, le fibrinogène
présent dans le plasma peut induire en erreur dans la détection de
bandes monoclonales dans le protéinogramme. D’autres laboratoires
utilisent le sérum qui, en plus d’être plus économique, évite les
possibles interférences de l’héparine.Dans la présente étude, 6
électrolytes ont été mesurés dans des échantillons recueillis dans
des tubes secs avec gel séparateur, et dans des tubes avec
héparinate de lithium avec et sans séparateur dans le but de
comparer les résultats. Cette comparaison a été étendue à des tubes
maintenus à température ambiante et ouverts pendant 2 heures,
situation qui se produit parfois dans la pratique quotidienne, due
surtout à des pannes fortuites des auto-analyseurs et risquant
d’introduire des changements en raison de la diminution du glucose
et ses conséquences sur la pompe de sodium, potassium-ATPase, le
mouvement de l’eau vers les cellules provoquant une
hémoconcentration et la libération de constituants intracellulaires
[4].
Matériel et méthodes
Les 6 paramètres (sodium, potassium, chlore, phosphate, calcium et
magnésium) ont été déterminés dans les échantillons de 36 patients
volontaires, recueillis en triple exemplaire dans des tubes secs de
4 mL avec gel séparateur, des tubes avec héparinate de lithium de 5
mL avec séparateur et des tubes avec héparinate de lithium de 5 mL
sans séparateur. Le diamètre de ces tubes est de 13 mm et la
longueur est de 75 mm (100 mm pour les tubes avec héparinate avec
séparateur). Tous les tubes sont de la marque Vacuette (Greiner
Bio-One) et la concentration d’héparine est de 14 UI/mL.
Dans les 30 minutes après les prélèvements, les tubes ont été
centrifugés à température ambiante pendant 10 minutes à 1 500 g.
Les dosages sont ensuite immédiatement effectués dans les trois
types d’échantillons (temps zéro), puis 60 et 120 minutes après, en
ayant laissé les tubes ouverts et à température ambiante.
Une évaluation qualitative de l’aspect du sérum et du plasma a
également été réalisée, dans le but d’éliminer toute interférence
macroscopique (turbidité, hémolyse…).
Tous les paramètres ont été analysés sur un Hitachi Modular P,
en utilisant les méthodes suivantes :
- – sodium, potassium et chlore : potentiométrie
indirecte ;
- – phosphate : réaction du phosphate avec le molybdate
d’ammonium en présence d’acide sulfurique, pour former un complexe
de phosphomolybdate d’ammonium mesuré par photométrie à 340 nm
(adaptation du fournisseur Roche®) ;
- – calcium : méthode colorimétrique en point final avec
blanc échantillon, basée sur la réaction du calcium avec
l’o-crésol-phtaléine-complexon dans une solution alcaline. Le
magnésium est masqué par la 8-hydroxyquinoline (adaptation
Roche®) ;
- – magnésium : réaction avec le bleu de xylidyle, en
solution alcaline en présence d’ EDTA pour masquer le calcium et
former un sel de diazonium. La concentration de magnésium est
mesurée par photométrie (diminution de l’extinction du bleu de
xylidyle).
Les intervalles de référence des paramètres sont : sodium :
135-145 mmol/L ; potassium : 3,5-5,2 mmol/L ; chlore : 97-108
mmol/L ; calcium : 2,15-2,55 mmol/L ; phosphore : 0,87-1,45
mmol/L et magnésium : 0,65-1,05 mmol/L.
La concordance a été évaluée par le coefficient de corrélation
intraclasse, considérant qu’il y a un bon accord à partir de 0,81.
L’exactitude des résultats a été comparée par régression
linéaire : en estimant la présence d’une erreur systématique
constante si l’ordonnée à l’origine est différente de zéro et
proportionnelle si la pente est différente de 1. L’établissement de
graphiques de Bland-Altman permet de détecter une erreur
systématique (constante ou proportionnelle). Toutes les estimations
ont été obtenues avec le logiciel statistique StatsDirect ® version
2.4.4.
Résultats
Les valeurs moyennes des paramètres analysés aux temps 0, 60 et 120
minutes pour chaque type d’échantillon sont présentées dans le
tableau 1( Tableau 1 ). La concordance
entre les différents types d’échantillons a été très bonne (tableau
2( Tableau 2 )). La mesure du potassium
est la seule pour laquelle on a observé un accord inférieur à 0,9
entre les résultats obtenus sur sérum avec ceux obtenus sur plasma,
dû à une erreur systématique constante (tableau 3( Tableau 3 ) et ( figure 1 )). L’accord et
l’exactitude des paramètres analysés aux différents temps sont
bonnes pour les trois types d’échantillons (tableau 4( Tableau 4 )).
Tableau 1 Valeurs moyennes (et déviations standards)
des paramètres analysés dans les trois types d’échantillon aux
temps 0, 60 et 120 minutes (mmol/L).
|
Sérum
|
Plasma sans séparateur
|
Plasma avec séparateur
|
|
0 min
|
60 min
|
120 min
|
0 min
|
60 min
|
120 min
|
0 min
|
60 min
|
120 min
|
|
Sodium
|
138,86 (0,67)
|
139,03 (0,67)
|
139,64 (0,66)
|
138,30 (0,67)
|
138,55 (0,67)
|
139,00 (0,67)
|
138,11 (0,69)
|
138,22 (0,66)
|
138,58 (0,65)
|
|
Potassium
|
4,23 (0,07)
|
4,24 (0,07)
|
4,26 (0,07)
|
4,03 (0,07)
|
4,03 (0,07)
|
4,03 (0,08)
|
4,03 (0,08)
|
4,03 (0,08)
|
4,04 (0,08)
|
|
Chlore
|
102,05 (0,75)
|
102,19 (0,75)
|
102,16 (0,74)
|
101,86 (0,76)
|
102,00 (0,79)
|
102,11 (0,78)
|
101,91 (0,76)
|
101,94 (0,75)
|
101,80 (0,74)
|
|
Calcium
|
2,26 (0,04)
|
2,27 (0,04)
|
2,28 (0,04)
|
2,27 (0,04)
|
2,29 (0,04)
|
2,30 (0,04)
|
2,26 (0,04)
|
2,27 (0,04)
|
2,29 (0,04)
|
|
Phosphore
|
1,19 (0,08)
|
1,20 (0,08)
|
1,24 (0,08)
|
1,15 (0,08)
|
1,15 (0,08)
|
1,19 (0,07)
|
1,15 (0,08)
|
1,15 (0,08)
|
1,19 (0,08)
|
|
Magnésium
|
0,80 (0,02)
|
0,81 (0,02)
|
0,82 (0,01)
|
0,81 (0,02)
|
0,81 (0,02)
|
0,082 (0,01)
|
0,81 (0,02)
|
0,81 (0,02)
|
0,82 (0,01)
|
Tableau 2 Concordance entre les divers paramètres dans
des échantillons de sérum et de plasma frais (temps 0), et
conservés 60 et 120 minutes à température ambiante en tubes non
bouchés.
|
Temps 0 (n = 36)
|
60 min (n = 36)
|
120 min (n = 36)
|
|
S-PSS
|
S-PCS
|
PSS-PCS
|
S-PSS
|
S-PCS
|
PSS-PCS
|
S-PSS
|
S-PCS
|
PSS-PCS
|
|
Sodium
|
0,968
|
0,965
|
0,973
|
0,955
|
0,942
|
0,961
|
0,946
|
0,929
|
0,962
|
|
Potassium
|
0,872
|
0,867
|
0,991
|
0,862
|
0,861
|
0,991
|
0,850
|
0,857
|
0,992
|
|
Chlore
|
0,989
|
0,992
|
0,994
|
0,975
|
0,985
|
0,984
|
0,980
|
0,983
|
0,980
|
|
Calcium
|
0,972
|
0,981
|
0,992
|
0,914
|
0,981
|
0,937
|
0,984
|
0,987
|
0,994
|
|
Phosphore
|
0,989
|
0,989
|
0,996
|
0,986
|
0,984
|
0,997
|
0,983
|
0,983
|
0,992
|
|
Magnésium
|
0,960
|
0,978
|
0,985
|
0,967
|
0,935
|
0,968
|
0,979
|
0,934
|
0943
|
Tableau 3 Corrélation des résultats entre des
échantillons de sérum et de plasma avec ou sans séparateur. Valeurs
de la pente et ordonnée à l’origine entre les valeurs basales
(temps 0) des différents types d’échantillon.
|
y: sérum / x: plasma sans séparateur
|
y: sérum / x: plasma avec séparateur
|
y: plasma avec séparateur / x: plasma sans séparateur
|
|
Pente (IC95%)
|
Ordonnée dans l’origine (IC95%)
|
Pente (IC95%)
|
Ordonnée dans l’origine (IC95%)
|
Pente (IC95%)
|
Ordonnée dans l’origine (IC95%)
|
|
Sodium
|
0,987 (0,914 – 1,060)
|
2,294 (- 7,803 – 12,391)
|
0,964 (0,901 – 1,028)
|
5,603 (- 3,209 – 14,416)
|
1,002 (0,922 – 1,081)
|
- 0,472 (- 11,51 – 10,565)
|
|
Potassium
|
0,958 (0,870 – 1,045)
|
0,367 (0,012 – 0,723)
|
0,919 (0,832 – 1,005)
|
0,530 (0,179 – 0,881)
|
1,032 (0,989 – 1,076)
|
- 0,138 (- 0,316 – 0,038)
|
|
Chlore
|
0,974 (0,927 – 1,020)
|
2,848 (- 1,918 – 7,615)
|
0,974 (0,934 – 1,015)
|
2,723 (- 1,395 – 6,842)
|
0,996 (0,960 – 1,032)
|
0,435 (- 3,255 – 4,126)
|
|
Calcium
|
1,030 (0,947 – 1,114)
|
- 0,076 (- 0,267 – 0,114)
|
1,041 (0,973 – 1,108)
|
- 0,0889 (- 0,242 – 0,063)
|
0,993 (0,953 – 1,033)
|
0,006 (- 0,084 – 0,098)
|
|
Phosphore
|
1,007 (0,968 – 1,045)
|
0,037 (- 0,010 – 0,084)
|
1,028 (0,989 – 1,067)
|
0,009 (- 0,038 – 0,057)
|
0,976 (0,949 – 1,003)
|
0,003 (- 0,003 – 0,063)
|
|
Magnésium
|
0,965 (0,874 – 1,055)
|
0,020 (- 0,053 – 0,094)
|
0,993 (0,922 – 1,064)
|
0,000 (- 0,057 – 0,057)
|
0,974 (0,921 – 1,026)
|
0,018 (0,024 – 0,061)
|
Tableau 4 Concordances entre les valeurs obtenues au
temps 0 (T0) et celles obtenues à 60 et 120 minutes.
|
Sérum
|
Plasma sans séparateur
|
Plasma avec séparateur
|
|
T0 – 60 min
|
T0 – 120 min
|
T0 – 60 min
|
T0 – 120 min
|
T0 – 60 min
|
T0 – 120 min
|
|
Sodium
|
|
|
|
|
|
|
|
Potassium
|
|
|
|
|
|
|
|
Chlore
|
|
|
|
|
|
|
|
Calcium
|
|
|
|
|
|
|
|
Phosphore
|
|
|
|
|
|
|
|
Magnésium
|
|
|
|
|
|
|
Discussion
La valeur moyenne du phosphore est légèrement supérieure dans le
sérum à celle obtenue dans les deux types d’échantillon
plasmatique. Ces différences sont semblables à celles observées
dans d’autres études [1, 5, 6]. Cette augmentation du phosphore
dans le sérum est probablement due à la libération de cet
électrolyte par les hématies pendant le processus de coagulation
[5].
Malgré les différences obtenues dans notre étude, les accords
sont très bons (tableau 2) et on n’observe aucun type d’erreur
systématique, proportionnelle ni constante, entre les trois types
d’échantillons analysés (tableau 3). Pour cette raison, nous
pensons qu’il n’est pas nécessaire d’établir des intervalles de
référence différents pour sérum et plasma.
Pour le phosphore, malgré une tendance à augmenter avec le
temps, nous n’observons pas de différence entre les valeurs
initiales et celles trouvées à 60 et 120 minutes (tableau 4).
Tant pour le calcium que pour le magnésium, les valeurs moyennes
basales des trois échantillons sont très semblables et ne montrent
pas de différence significative entre elles. La stabilité, dans la
période des deux heures, du calcium et du magnésium est également
bonne, en remarquant une tendance à l’augmentation des valeurs avec
le temps tout comme pour le phosphore.
Dans notre étude, les valeurs de sodium dans le sérum sont
discrètement supérieures aux niveaux dans le plasma, comme il a été
noté dans d’autres études [6, 7]. Certains auteurs [1, 8] trouvent
des valeurs modérément plus hautes dans le plasma, bien que les
différences ne soient pas significatives du point de vue
clinique.
Les valeurs dans les trois types d’échantillon sont stables tant
après une heure qu’après deux heures. Bien que le sodium, le
calcium et le magnésium puissent être modifiés par
l’hémoconcentration produite par le mouvement d’eau à l’intérieur
de cellules avec le temps [4], il n’y a pas de variations
significatives en deux heures.
Les valeurs de chlore sont très semblables dans le sérum et les
échantillons de plasma (légèrement supérieures dans le sérum).
Certains auteurs obtiennent des résultats semblables avec des
valeurs légèrement plus élevées dans le sérum [6] ou bien l’inverse
[1, 8]. Il y a une corrélation excellente dans les valeurs
initiales et celles obtenues après deux heures.
Les petites variations entre les valeurs moyennes des différents
échantillons pour le chlore et les paramètres précédents ne sont
pas statistiquement significatives (tableau 3).
Pour le potassium, nous trouvons des valeurs nettement
supérieures dans le sérum, observation souvent mentionnée [1, 6,
8]. Cette différence est vérifiée par l’analyse des droites de
régression permettant d’apprécier une erreur systématique constante
(ordonnée à l’origine différente de zéro). Nous interprétons ces
observations, comme étant dues à la libération de potassium par les
plaquettes au moment de la coagulation [8, 9].
Comme pour les autres paramètres étudiés, la stabilité du
potassium est bonne pour les périodes de temps étudiées. Certains
auteurs obtiennent également des valeurs semblables pour tous ces
paramètres dans les deux premières heures, dans des échantillons
centrifugés [4] ou non [10].
Conclusion
Nous concluons que les résultats sont concordants entre les trois
types d’échantillons étudiés. Seul le potassium nécessiterait une
correction par la droite de régression pour garantir la
transférabilité des résultats entre un type d’échantillon et un
autre.
La conservation à température ambiante, en tubes ouverts, ne
produit pas de changements significatifs des résultats, au moins
pendant deux heures.
Références
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Breitenfeld D. Differences between values for plasma and serum
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héparine ? Ann Biol Clin (Paris) 2004 ; 62 :
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5 Ciuti R. Serum and Plasma compared for use in 19 common
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6 Lum G, Gambino SR. A comparison of serum versus
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The nordic reference interval project 2000 : recommended
reference intervals for 25 common biochemical properties. Scand J
Clin Lab Invest 2004 ; 64 : 271-84.
8 Racine JF, Caya S, Delvin EE. Suitability of
lithium heparinate plasma for the measurement of selected analytes
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Pseudohyperkalemia and platelet counts. N Engl J Med 1991 ;
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10 Foucher B, Pina G, Desjeux G,
Prevosto JM, Chaulet JF, Cheminel V. Influence de la
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