Illustrations
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Schéma d’un exemple de réarrangement du locus IgH et de mise au point d’un système de PCR clonospécifique.
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A) Intérêt de la cytométrie multiparamétrique. La combinaison de nombreux marqueurs permet d’interroger chaque cellule avec précision et de la caractériser au mieux pour déterminer sa nature : lymphoïde ou non, B ou T, mature ou immature, normale ou anormale (d’après Chattopadhyay [20] ). B) Différentes catégories de marqueurs LAIP (pour leukemia associated immunophenotype ). Expression aberrante :la coexpression CD19/CD33 n’existe pas à l’état physiologique; asynchronisme d’expression : le CD34 disparaît physiologiquement avant l’apparition du CD20 si bien que la coexpression du CD34 et du CD20 est nécessairement pathologique ; l’expression de certains marqueurs est modulée dans les LAL-B comme l’expression habituellement plus faible du CD38 et du CD45 sur les blastes leucémiques que ne le voudrait la physiologie. Bleu : lymphoblastes physiologiques; Orange : lymphoblastes pathologiques. C) Profil d’expression de quelques marqueurs au cours de la lymphopoïèse B. Détermination de différents stades permettant d’apprécier les différents phénotypes physiologiques et de visualiser notamment que la coexpression du CD34 et du CD20 n’existe pas à l’état physiologique. D) Synthèse du profil d’expression de trois marqueurs antigéniques en trois dimensions (CD10, CD20, CD34). La lymphopoïèse B révèle un phénotype continu avec des modulations antigéniques concomitantes des différents stades de maturation. (rouge, vert, rose et orange : lymphoblastes physiologiques de stades I, II, III et lymphocytes B respectivement). E) Les schémas phénotypiques récapitulant la normalité , c’est-à-dire le profil d’expression antigénique des lymphoblastes B régénératifs que le biologiste utilise pour l’interprétation des résultats afin d’identifier les phénotypes déviants du profil d’expression physiologique (d’après Lucio et al. , Leukemia 1999). En gris, lymphoblastes physiologiques ; en rouge et figures géométriques lettrées : lymphoblastes pathologiques. F) Exemple d’analyse par un outil d’intégration multiparamétrique. En haut, représentation bidimensionnelle en analyse en composante principale intégrant l’expression antigénique de 12 marqueurs par les lymphoblastes B, permettant la discrimination des événements normaux/régénératifs des cellules pathologiques. En bas, représentation de la maturation physiologique sur une ligne de base (gris) et illustration des événements pathologiques résiduels (rouge) dont le phénotype dévie du profil physiologique. Ce type d’outil reproduit de manière automatisée le raisonnement d’intégration des données réalisé par l’expert. Vert : lymphoblastes/-cytes B normaux ; bleu : lymphoblastes régénératifs ; rouge : lymphoblastes B pathologiques (d’après van Dongen et al. , Blood 2015).
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Auteurs
1 service d’hématologie biologique, hôpital Saint-Louis, AP-HP, Université de Paris, France
2 service d’hématologie biologique, hôpital Saint-Louis, AP-HP, Université de Paris, France
3 service d’hématologie biologique, hôpital Saint-Louis, AP-HP, Université de Paris, France
Les leucémies aiguës lymphoblastiques (LAL) constituent un groupe hétérogène de maladies, dont le profil de réponse au traitement est très variable. L’évaluation du pronostic et l’adaptation de la stratégie thérapeutique sont fondamentales pour traiter au mieux la maladie dans le cadre d’une médecine toujours plus personnalisée. Au-delà de la caractérisation biologique de la tumeur au diagnostic, l’évaluation fine de la réponse au traitement par la quantification de la maladie résiduelle minimale (MRD) s’est affirmée comme un prédicteur pronostique puissant dans les LAL. Elle est devenue un outil décisionnel pour la stratification thérapeutique des LAL de l’enfant et de l’adulte. Cette revue s’intéresse plus particulièrement aux aspects biologiques de la MRD, en traitant les approches technologiques couramment utilisées dans les laboratoires d’oncohématologie spécialisés. Différentes techniques de biologie moléculaires et la cytométrie en flux sont ainsi décrites, de même que les forces, limites et nouveaux défis inhérents à chaque technologie.
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